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Biblioteca(s): | Embrapa Mandioca e Fruticultura.
Data corrente: | 10/04/1992
Data da última atualização: | 10/04/1992
Autoria: | SOUZA JUNIOR, M. T.
Afiliação: | Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria. Centro Nacional de Pesquisa de Mandioca e Fruticultura.
Título: | Uso de un cDNA de gama-zeina marcado com biotina na caracterizacao de genotipos de milho (Zea mays L.)
Ano de publicação: | 1991
Fonte/Imprenta: | Lavras, MG: Escola Superior de Agricultura de Lavras, 1991
Páginas: | 85 p.
Idioma: | Português
Conteúdo: | Buscou-se viabilizar o uso do fragmento  ZM5, um dsDNA de aproximadamente 900pb obtido a partir do mRNA de gama-zeina (27KD), como sonda marcada com biotina na caracterizacao de genotipos de milho que apresentavam distintos teores desta proteina. Para tanto avaliou-se a utilizacao de dois tipos de marcacao, "Nick-translation" e Polimerizacao da fita sense do bacteriofago M13mp18 trazendo o ZM5 inserido; alem de tres tipos de nucleotideos marcados: Biotina-7-dATP, Biotina-14-dATP e Biotina-11-dUTP. Tendo em vista a necessidade de utilizacao de um protocolo de isolamento e purificacao de DNA genomico de milho que fosse simples, rapido, barato, e que produzisse DNA de alto peso molecular em quantidade e com alto grau de pureza, foram avaliados 5 protocolos de isolamento. Procedeu-se tambem a realizacao de "Southern-blot" com DNA de estirpes de Rhizobium sp. sendo utilizados como DNA alvo, e o fragmento de DNA PCQ15 (4Kb) marcado via "Nick-translation". Observou-se que a utilizacao de fragmentos com 4Kb ou mais, marcados com Biotina-14-dATP ou Biotina-11-dUTP via "Nick-translation" permitia, seguindo o material e metodos descrito, detectar copias unicas de fragmentos no DNA genomico dos materiais. Fragmentos, com 1Kb ou menos, so permitia deteccao de copia unica quando inserido no bacteriofago M13 e marcado com com Biotina-11-dUTP. A maior limitacao do presente trabalho foi obter um protocolo de isolamento e purificacao que viesse a satisfazer todas as caracteristicas inicialmente desejadas.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Mandioca e Fruticultura (CNPMF)
Exemplares: | CNPMF - (19543-1) - ADD - TS - -- - T07/91 -  - T07/91 - DIS